細胞培養(yǎng)是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境，使之生存、生長、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種方法。在利用細胞培養(yǎng)瓶進行細胞培養(yǎng)過程中會遇到各種各樣的問題，細胞抱團就是比較常見的一類，如果細胞培養(yǎng)前期多加注意，這種情況是可以避免的。下面對細胞成團詳細分析中：
一、細胞成團的原因：
1、消化的過程過于粗暴，吹打太用力，消化過久，消化液太強或有毒性等會導(dǎo)致細胞死亡。細胞死亡后會釋放出DNA，纏繞其他細胞，形成黏性的細胞團。
2、細胞離心速度過大或時間太長，也容易造成細胞抱團。
3、消化不完全的時候，細胞和細胞之間的連接沒有分開；消化過度的時候，圓形的細胞容易聚堆，再分開很困難。
4、狀態(tài)不好、老化的細胞，也可能會出現(xiàn)抱團生長的情況（比如換液不及時、長得太滿才傳代、污染等造成的細胞狀態(tài)差）。
5、傳代時沒有吹打均勻，細胞團多，培養(yǎng)時就會是一團一團的。
6、非震蕩培養(yǎng)或細菌（胞）量過多的話就會成團。
二、如何避免細胞成團的現(xiàn)象？
首先確認(rèn)當(dāng)前細胞生長密度及狀態(tài)，80%左右的生長密度即可進行傳代，此時細胞狀態(tài)較好，且用于傳代的數(shù)量也足夠。傳代操作前，使用緩沖液對細胞進行適當(dāng)且全面地潤洗，清除死亡的細胞團和部分堆疊雜質(zhì)(在選擇適當(dāng)胰酶濃度時，對于不同代數(shù)的不同細胞系需進行一定的調(diào)整，如：部分貼壁牢固的細胞應(yīng)將胰酶分裝后，進行預(yù)熱處理;細胞密度過高時，應(yīng)該向胰酶中加入少量緩沖液，緩慢均勻地消化細胞等。對于貼壁格外牢固的細胞，可以嘗試多次分批進行消化，最大限度保證細胞狀態(tài))。
在消化過程中，需均勻慢速晃動培養(yǎng)器皿，以免局部胰酶濃度過高而影響傳代。切勿用力搖動，導(dǎo)致邊緣松動的大片細胞直接脫落，從而增加細胞成團幾率。培養(yǎng)器皿的選擇也需注意，部分實驗室會使用玻璃培養(yǎng)瓶，因細胞貼壁在玻璃底更容易分離。同時玻璃材質(zhì)的親水性和塑料有區(qū)別，而且玻璃細胞培養(yǎng)瓶都是實驗室內(nèi)部處理，可能會有清潔殘留，在一定程度上抑制細胞的貼壁生長，并且更容易消化，細胞之間的連接比貼壁還要緊密，聚團幾率很大。另外，避免傳代過程中匯合度較大，本身1:3甚至1:4都可以正常培養(yǎng)的細胞被1:2傳代，會導(dǎo)致母代細胞濃度過高，在分化過程中出現(xiàn)堆疊現(xiàn)象適當(dāng)?shù)奶幚砗驮O(shè)備使用，也可以減少成團。如果使用離心機分離或混合樣品，將其設(shè)置為正確的速度可以減少聚團，通常情況下，較快的速度可以離心散細胞，但在高速下也必須考慮細胞的脆弱性。
三、細胞成團如何處理？
1、如果細胞抱團不影響生長就沒問題，只是計數(shù)時較麻煩。在消化時，可在細胞由多角形變成圓型之前，用手輕磕培養(yǎng)瓶的側(cè)壁，使細胞從壁上脫落（最好不要吹打，對細胞形狀和生長都不好）。
2、如果感覺有死細胞的DNA，在細胞懸液中加入幾滴無菌的DNAse()（1mg/ml溶于水）將DNA鏈打斷。輕柔地吹打細胞，防止對細胞膜造成物理損傷。
3、如果細胞抱團是肉眼可見的，可讓細胞靜置半分鐘左右，然后吸取上半部分沒有抱團的細胞懸液來傳代。如果細胞抱團肉眼不可見，目前還沒有特別好的分離方法，只能等細胞狀態(tài)改善后將這部分細胞慢慢排除出去。
