ELISA和Western-blot的基本實(shí)驗(yàn)原理是一致的——都是基于抗原-抗體特異性結(jié)合免疫結(jié)合反應(yīng)的原理，不同的地方則是在于實(shí)驗(yàn)過程，還有實(shí)驗(yàn)想要的結(jié)果數(shù)據(jù)等等。蛋白質(zhì)分析和鑒定方法常用的就是ELISA和Western Blot（以下簡稱WB）。主要區(qū)別在于：
? ELISA對于抗原、抗體都能檢測。
? WB則主要檢測抗原。
此外，了解這兩種方法的優(yōu)缺點(diǎn)，即可輕而易舉地解決如何選擇的問題。
一、ELISA:
? 靈敏度高、應(yīng)用領(lǐng)域廣泛，檢測樣本濃度可低至pg/ml，操作相對簡單，用于確定樣品中是否存在蛋白質(zhì)的高效方法，亦可精確定量蛋白質(zhì)的濃度。
? ELISA 具有包被、封閉、檢測、 結(jié)果讀取4個常規(guī)操作步驟，有直接、間接、夾心及競爭檢測4種主要類型。
ELISA的優(yōu)缺點(diǎn)：
優(yōu)點(diǎn)：適合體液(血清、尿液等)、細(xì)胞上清樣本；靈敏度高，操作簡單、高效、快速（1-2h），需樣品量較少，可以同時進(jìn)行多個樣本分析。另外，也可靈活地DIY 檢測試劑盒，即可降低成本，又解決了實(shí)驗(yàn)需求；同時ELISA可搭配實(shí)驗(yàn)室高通量或自動化設(shè)備，實(shí)現(xiàn)自動化操作。
缺點(diǎn)：實(shí)驗(yàn)操作過程中，由于操作問題、樣品污染、使用低質(zhì)量試劑等原因，其特異性方面經(jīng)常受到影響，可能會產(chǎn)生假陽性或假陰性結(jié)果；此外試劑盒中的抗體組分須低溫運(yùn)輸、儲存；ELISA無法提供有關(guān)目標(biāo)蛋白的質(zhì)量和豐度等其他信息。
二、Western Blot：
? Western Blot是一種通過電泳、轉(zhuǎn)膜、抗體孵育、成像等步驟對目標(biāo)蛋白進(jìn)行檢測的方法。
? 操作流程相對復(fù)雜，用于識別和了解蛋白質(zhì)的一些特征元素、蛋白質(zhì)相互作用和修飾等。
? 可提供目標(biāo)蛋白的詳細(xì)信息，如蛋白質(zhì)大小和豐度等，也常被用于ELISA和其他檢測方法結(jié)果的驗(yàn)證，它可以有效地幫助排除假陽性或假陰性的結(jié)果。
Western Blot的優(yōu)缺點(diǎn)：
優(yōu)點(diǎn)：適用于組織或細(xì)胞裂解液樣本；檢測結(jié)果簡單易懂；特異性高，能夠從多種蛋白質(zhì)中識別目標(biāo)蛋白；可提供目標(biāo)蛋白的分子量、表達(dá)豐度等信息；熒光Western Blot，可以在一個實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行多重檢測，檢測多種蛋白質(zhì)。
缺點(diǎn)：傳統(tǒng)操作步驟繁瑣、耗時（1到2天），體系如果沒有優(yōu)化，容易出現(xiàn)信號衰減快、高背景等情況，導(dǎo)致不理想的檢測結(jié)果；同時檢測靶蛋白的數(shù)量受限于一抗和二抗的組合；通常被用作驗(yàn)證方法。
三、ELISA or Western Blot怎么選？
若實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖切枰?/font>簡單、快速地確定蛋白質(zhì)是否存在，并需要得到精確濃度，ELISA是更好的選擇。
若實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖切枰玫?/font>更多關(guān)于蛋白質(zhì)的信息，比如分子量、純度、蛋白質(zhì)間相互作用、蛋白質(zhì)表達(dá)變化或翻譯后修飾等，則Western Blot更適合。
此外，Western Blot和ELISA檢測的結(jié)果也可相互印證。
